PCR是分子生物學(xué)研究重要的工具，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA段的分子生物學(xué)技術(shù)。基因擴(kuò)增PCR儀是由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機(jī)界面等各部分組成的，主要用于科研及臨床的基因擴(kuò)增、定性PCR基因擴(kuò)增、熒光/酶免終點(diǎn)定量DNA基因擴(kuò)增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴(kuò)增等。
基因擴(kuò)增的基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。
1、DNA模板：待拷貝的DNA稱為模板，它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA，Z后擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。
2、引物：是DNA復(fù)制的先鋒，就象結(jié)晶過程中的晶核，引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)：是DNA復(fù)制的動(dòng)力，在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。
4、緩沖液：提供DNA合成反應(yīng)所需的pH，離子強(qiáng)度等環(huán)境。
5、4種單核苷酸：dNTP，提供DNA合成原料。
它可以在試管里建立反應(yīng)，經(jīng)過數(shù)小時(shí)之后，就能將極微量的目的基因或者某一特定的DNA段擴(kuò)增數(shù)十萬倍，乃至千百萬倍，而無需通過繁瑣費(fèi)時(shí)的基因克隆程序，便可獲得足夠數(shù)量的精確的DNA拷貝，所以有人亦稱之為無細(xì)胞的分子克隆法。
PCR反應(yīng)一般設(shè)置20~40次循環(huán)，每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個(gè)循環(huán)的模板。PCR的擴(kuò)增效率很高，如果循環(huán)次數(shù)是30次，那么新生DNA段理論上達(dá)到230拷貝(約為109個(gè)分子)。擴(kuò)增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)并輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實(shí)時(shí)輸出量化結(jié)果。
更新時(shí)間：2022-08-17 
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