PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
基因擴增PCR儀的本質(zhì)是體外核酸擴增，加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性→退火→引物延伸”過程至25～40個循環(huán)，呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標記，使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結(jié)合，擴增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統(tǒng)，實時輸出量化結(jié)果。
傳統(tǒng)儀器只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是價格要低很多，而且運行成本也要低很多。不過不能直接得到擴增結(jié)果，還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病，品種分子標記篩選，甚至親自鑒定等都可以由它完成。
但是，某些需要定量的實驗就必須用到實時定量PCR了。比如檢測某些病原物的數(shù)量(血液乙肝病毒復制程度)，特定基因的表達量(比如結(jié)合反轉(zhuǎn)錄做的RNA定量分析)，某些基因在染色體組中拷貝數(shù)(以前往往使用southern blot技術)等等。基因擴增PCR儀一般不需要對擴增產(chǎn)物進行電泳分析，操作相對簡單些，但是耗材實在是貴。簡單來說，看有沒有用傳統(tǒng)儀器，看有多少用熒光定量PCR。傳統(tǒng)儀器只能擴增，不能檢測，便宜。基因擴增PCR儀除了擴增，還能在擴增的同時檢測DNA發(fā)出的熒光信號，試劑和儀器都更貴。
更新時間：2022-10-10 
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